關(guān)鍵詞：伊立替康，Onivyde，脂質(zhì)體，主動載藥，蔗糖八硫酸酯鉀

一、 伊立替康脂質(zhì)體Onivyde的發(fā)展歷程

伊立替康，又名CPT-11、開普拓等，屬于喜樹堿衍生物，拓?fù)洚悩?gòu)酶I抑制劑，是國際抗癌藥物市場上一大類主導(dǎo)產(chǎn)品，目前廣泛應(yīng)用于結(jié)腸癌等腫瘤疾病的治療，對氟尿嘧啶耐藥病例仍有效。目前該藥已在全球100多個(gè)國家上市，臨床上廣泛應(yīng)用于轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌、小細(xì)胞肺癌的一/二線、胰腺癌的一/二線治療，2001年在國內(nèi)上市。

圖1 伊立替康結(jié)構(gòu)式

伊立替康能在羧酸酯酶作用下轉(zhuǎn)化成具有100-1000倍更高活性的代謝物SN-38。SN-38不可被P-糖蛋白識別，因此伊立替康可能在對其它標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)療法具有抗性的腫瘤上具有活性。

最初投入市場的制劑類型是鹽酸伊立替康注射液，但在實(shí)際使用的過程中，該劑型逐漸暴露出一個(gè)問題：伊立替康的內(nèi)酯環(huán)結(jié)構(gòu)易水解，在pH>6條件下平衡快速向羧酸鹽型方向轉(zhuǎn)化。羧酸鹽型的伊立替康藥理活性低，毒性更強(qiáng)。生理?xiàng)l件（pH 7.4）下，由于血清蛋白優(yōu)先與羧酸鹽絡(luò)合而使平衡偏向活性低的羧酸型，造成有效的內(nèi)酯型比例過低，達(dá)到平衡時(shí)，“低效高毒"的羧酸鹽形式化合物所占比重高達(dá)90%。因此，研制一種提高內(nèi)酯型穩(wěn)定性的伊立替康制劑的需求愈發(fā)迫切。

圖2 伊立替康內(nèi)酯型→伊立替康羧酸型的轉(zhuǎn)化過程

于是，研發(fā)者們將目光投向了新型藥物遞送系統(tǒng)——脂質(zhì)體，經(jīng)過十多年研發(fā)，終于成功研制出伊立替康脂質(zhì)體Onivyde，并由此引出了一段波折起伏的故事。

2003年2月，中國臺灣智擎生技制藥（PharmaEngine）創(chuàng)立，其總經(jīng)理葉常菁博士慧眼識珠，以300萬美金的價(jià)格從美國Hermes Biosci公司購得PEP02（MM-398，Onivyde前身）的開發(fā)權(quán)利，帶領(lǐng)二十多名員工潛心研發(fā)十多年。

2012年，該項(xiàng)目在中國臺灣以外的市場及開發(fā)等全部活動權(quán)以約2.2億美元的價(jià)格授權(quán)給美國Merrimack公司。從300萬到2.2億，僅用了9年時(shí)間。

2014年Merrimack公司又將該項(xiàng)目除美國和中國臺灣之外的所有權(quán)以約10億美元的價(jià)格售予美國Baxter（百特）。其后，Baxter開始進(jìn)行該項(xiàng)目在其它國家及地區(qū)的新藥申請并將美國以外市場授權(quán)Shire（夏爾）。

2015年，Onivyde通過美國FDA新藥上市核準(zhǔn)，聯(lián)合5-氟尿嘧啶和甲酰四氫葉酸（5-FU/LV），用于治療既往接受吉西他濱為基礎(chǔ)的化療藥物治療病情進(jìn)展的胰腺轉(zhuǎn)移性腺癌患者。

2016年10月，Onivyde獲得歐洲EMA新藥上市核準(zhǔn)。

2017年，Onivyde獲得韓國及新加坡藥證核準(zhǔn)。

2017年，Merrimack再次出售該項(xiàng)目，將其美國的商業(yè)化權(quán)力和制備生產(chǎn)線以最高10.25億美元的總價(jià)售予IPSEN。

2018年，Shire將旗下腫瘤學(xué)業(yè)務(wù)以24億美元打包出售給Servier（施維雅），其中包括Onivyde。

2020年6月日本批準(zhǔn)Onivyde上市，用于治療化療后無法切除的胰腺癌。

自此，Onivyde出售史暫時(shí)告一段落，目前由三家公司持有，分別是中國臺灣智擎（中國臺灣地區(qū)）、Servier公司（歐亞區(qū)）及IPSEN公司（美洲區(qū)）。

圖3 Onivyde授權(quán)/轉(zhuǎn)讓歷程示意圖

Onivyde僅用十余年就從300萬美元的技術(shù)包發(fā)展到10億、24億美元的大項(xiàng)目，但業(yè)界均認(rèn)為這是劃算的買賣，因?yàn)槠涿闇?zhǔn)的是“癌王"胰腺癌，此外相關(guān)公司也在積極開發(fā)其他適應(yīng)癥，包括胃癌，肺癌，結(jié)直腸癌等。

圖4 Onivyde其他適應(yīng)癥及對應(yīng)開發(fā)階段

胰腺癌的治療一直是以吉西他濱為基礎(chǔ)的化療為主，對于復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移性的沒有好的治療方案。Onivyde是全一個(gè)，也是目前核準(zhǔn)使用在曾接受一線標(biāo)準(zhǔn)治療藥物吉西他濱失敗后的晚期轉(zhuǎn)移性胰腺癌的新藥。是近年來獲批的二線治療用藥。

目前Onivyde在美國售價(jià)為每針2,590美元左右，每二周打一次，平均全年藥費(fèi)約為11.7萬美元，僅IPSEN公司（美洲區(qū)）2019年該藥品銷售額已達(dá)1.35億歐元，2020年為1.23億歐元。此外，考慮到Onivyde有多個(gè)適應(yīng)癥（大腸直腸癌、胃癌、小細(xì)胞肺癌等）已進(jìn)入臨床二/三期試驗(yàn)，可以預(yù)期未來其銷售額及市場價(jià)值必呈上漲趨勢。

二、 伊立替康脂質(zhì)體在國內(nèi)的現(xiàn)狀及前景

Onivyde的仿制存在幾個(gè)突出優(yōu)勢：①技術(shù)壁壘小，仿制難度低；②工藝與阿霉素脂質(zhì)體相似；③處方及大致工藝已知；④市場規(guī)模及利潤具潛力；⑤原研即將到期。接下來筆者將對其中幾點(diǎn)進(jìn)行具體分析。

從生產(chǎn)工藝的角度，伊立替康脂質(zhì)體的制備技術(shù)采用的是梯度主動包封法，工藝過程分為乳化、擠壓整粒、超濾除醇/置換體系、藥物包封和過濾除菌等。這種生產(chǎn)工藝和已上市的鹽酸多柔比星脂質(zhì)體等主動載藥的品種類似，基本可以對現(xiàn)有已成熟的開發(fā)流程和生產(chǎn)放大工藝進(jìn)行復(fù)制，具有較強(qiáng)的技術(shù)可行性。

從注冊審評的角度，藥審機(jī)構(gòu)對脂質(zhì)體等特殊制劑的審評較為審慎，對一致性評價(jià)及報(bào)批工藝的可放大性要求較高。所以在申報(bào)時(shí)需要有充分的一致性評價(jià)數(shù)據(jù)（CMC&Preclinical），同時(shí)申報(bào)的工藝應(yīng)相對成熟。

從原研的角度，Onivyde在美國的于2025年到期，該也進(jìn)入了中國。根據(jù)目前的藥物注冊管理辦法，現(xiàn)在已經(jīng)可以著手進(jìn)行該藥物的注冊申報(bào)，待完成臨床、審評及生產(chǎn)準(zhǔn)備后，預(yù)計(jì)可在到期時(shí)獲批上市。

從競爭對手的角度，國內(nèi)目前有普通伊立替康在售，同時(shí)伊立替康脂質(zhì)體也有申報(bào)，但大部分廠家都是在Onivyde上市之前按照5類申報(bào)的（截止2021年11月底總計(jì)申報(bào)22個(gè)，其中報(bào)臨床20個(gè)，新藥申報(bào)16個(gè)，仿制申報(bào)僅1個(gè)），和國外已上市的品種有一定差異。由于不符合仿制藥的技術(shù)要求，此類申報(bào)要么重新遞交資料變更類別，要么繼續(xù)按照改良型新藥申報(bào)，這兩個(gè)選擇都會一定程度上抵消先行申報(bào)的時(shí)間優(yōu)勢。

圖5-1國內(nèi)伊立替康脂質(zhì)體藥品注冊與受理情況（截止2021.11，數(shù)據(jù)來源：藥智網(wǎng)）

圖5-2國內(nèi)伊立替康脂質(zhì)體臨床試驗(yàn)情況（截止2021.11，數(shù)據(jù)來源：藥智網(wǎng)）

由于最近的藥政改革，未來預(yù)計(jì)還會有更多廠家進(jìn)入特殊制劑領(lǐng)域，類似于Onivyde這種品種較新，市場潛力巨大的項(xiàng)目，成為各廠家競相仿制熱點(diǎn)的勢頭已初露端倪。而基于上述分析，相關(guān)企業(yè)入場的時(shí)間窗口仍然存在。未來*仿花落誰家？會給國內(nèi)醫(yī)藥領(lǐng)域帶來怎樣的變數(shù)？我們還需拭目以待。

三、 伊立替康脂質(zhì)體處方簡析

了解過伊立替康脂質(zhì)體的發(fā)展歷程與市場情況，它本身的處方工藝等方面又有哪些值得關(guān)注的點(diǎn)呢？根據(jù)EMA網(wǎng)站Onivyde的公共評估報(bào)告（《onivyde-epar-public-assessment-report_en》）以及易普森公司的文件內(nèi)容（申請公布號CN 108366965 A），筆者對伊立替康脂質(zhì)體的處方、成分、成品、實(shí)施方式和實(shí)施例等方面的信息進(jìn)行了整理及歸納。

1.簡介

伊利替康脂質(zhì)體成品是含5mg/ml三水合伊立替康（伊立替康蔗糖鹽）活性物質(zhì)的輸注溶液的濃縮物，活性物質(zhì)包裹在脂質(zhì)體中。

其他成分包括：

（1）以脂質(zhì)體形式存在的脂質(zhì)：

DSPC（1,2-二硬脂酰-SN-甘油-3-磷酸膽堿，CDE登記號：F20180000837；DMF備案號：6252；AVT貨號：S01005）；

膽固醇（CDE登記號：F20170000106；DMF備案號：024780；AVT貨號：001001）；

DSPE-MPEG2000（N-（羰基甲氧基聚乙二醇2000）-1,2-二硬脂酰-SN-甘油-3-磷酸乙醇胺鈉鹽，CDE登記號：F20170000595；AVT貨號：F01008）

（2）其他輔料:

蔗糖八硫酸酯鹽（CDE登記號：F20210000349；AVT貨號：011001，藥用注射級別，GMP生產(chǎn)，大量現(xiàn)貨供應(yīng)）

HEPES緩沖液，氯化鈉和注射用水。

2.活性物質(zhì)

鹽酸伊立替康三水合物，分子式為C33H38N4O6•HCl•3H2O。它的相對分子質(zhì)量為677.18，結(jié)構(gòu)如下：

圖6 三水合鹽酸伊立替康結(jié)構(gòu)式

活性物質(zhì)為淡黃色至黃色結(jié)晶粉末，具有吸濕性和光敏性，在DMSO和無水乙酸中自由溶解，在乙醇中微溶，在pH為4的緩沖液中少量溶解，在pH為2的緩沖液中微溶。由于手性中心的存在，伊立替康表現(xiàn)出立體異構(gòu)性。立體異構(gòu)的來源是原材料喜樹堿。經(jīng)研究證明，單晶形式的三水合鹽酸伊立替康是可以穩(wěn)定生產(chǎn)的。其多態(tài)性與成品的性能無關(guān)，因?yàn)榛钚晕镔|(zhì)在成品制造過程中會溶解。

活性物質(zhì)的技術(shù)參數(shù)包括以下檢驗(yàn)項(xiàng)目: 外觀、分析（HPLC）、鑒別（IR、HPLC）、手性純度（UV、HPLC）、氯化物鑒定（pH Eur.）、雜質(zhì)（HPLC）、殘留溶劑（pH Eur.）、水含量（KF）、重金屬（pH Eur.）、溶解度（pH Eur.）、著火殘留（pH Eur.）、微生物限度（pH Eur.）、細(xì)菌內(nèi)毒素（pH Eur.）。

由于其作用機(jī)制，伊立替康具有潛在的遺傳毒性和致癌性。不能排除原料、合成或降解過程中產(chǎn)生的中間體雜質(zhì)的致突變和致癌潛力。與ICH M7一致，在這些情況下，暴露于誘變雜質(zhì)不會顯著增加活性物質(zhì)的致癌風(fēng)險(xiǎn)。因此，活性物質(zhì)中的這些雜質(zhì)被控制在非誘變雜質(zhì)的可接受水平，符合ICH Q3A指南中描述的鑒別（0.10%）和確認(rèn)閾值（0.15%）。

穩(wěn)定性結(jié)果表明，活性物質(zhì)具有吸濕性且對光敏感，在避光和防潮的情況下是足夠穩(wěn)定的。在沒有特殊儲存條件的情況下儲存于符合規(guī)定的容器中時(shí)，建議的復(fù)驗(yàn)期為3年。

3.成品藥物

（1）產(chǎn)品和藥物開發(fā)的描述

成品為白色至微黃色不透明的無菌濃縮液，用于注射。它由含有鹽酸伊立替康三水合物的脂質(zhì)體等滲分散體組成。

脂質(zhì)體是直徑約110nm的單層磷脂雙分子層小泡，磷脂雙分子層包繞一個(gè)內(nèi)水相，其中含有凝膠或沉淀狀態(tài)的蔗糖鹽形式的伊立替康。脂膜由DSPC、膽固醇和MPEG-2000-DSPE組成。脂質(zhì)體分散在水緩沖溶液中。

根據(jù)原研，當(dāng)通過喜樹堿化合物（如伊立替康）與包封多硫酸酯化陰離子捕獲劑（如蔗糖八硫酸酯）的脂質(zhì)體反應(yīng)制備載藥脂質(zhì)體時(shí)，所得載藥脂質(zhì)體的穩(wěn)定性取決于捕獲劑-脂質(zhì)體中硫酸酯基團(tuán)的初始濃度和脂質(zhì)體中包封的喜樹堿與磷脂的比率。

在優(yōu)選的實(shí)施方式中，伊立替康脂質(zhì)體由DSPC、膽固醇和MPEG-2000-DSPE以3：2：0.015摩爾比組合的混合物制成。脂質(zhì)體制劑包括1,2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸膽堿(DSPC)的濃度為約6.81mg/mL、膽固醇的濃度為約2.22mg/mL、甲氧基封端的聚乙二醇(MW 2000)-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(MPEG-2000-DSPE)的濃度為約0.12mg/mL。

圖7 伊立替康脂質(zhì)體示意圖

三水合物鹽酸伊立替康以伊立替康蔗糖鹽的形式存在于脂質(zhì)體中。

脂膜由DSPC、膽固醇和MPEG-2000-DSPE組成。脂質(zhì)體輔料的功能是產(chǎn)生脂質(zhì)體雙層膜，形成包裹著活性物質(zhì)的單層囊泡，直到被輸送到目標(biāo)部位（如腫瘤組織）。選擇脂質(zhì)體輔料是由于它們的特性，當(dāng)它們結(jié)合在一起時(shí)，產(chǎn)生的脂質(zhì)體能夠主動負(fù)載和保留活性物質(zhì)，同時(shí)降低脂質(zhì)體在人體內(nèi)的蛋白結(jié)合水平，從而延長其在體內(nèi)的循環(huán)時(shí)間。

DSPC是脂質(zhì)體雙分子層的主要脂質(zhì)成分（(優(yōu)選占所有脂質(zhì)成分總重量的74.4％），基于其高純度而選擇。它是一種合成脂類，由明確的脂肪酸組成，具有相對較高的相轉(zhuǎn)變溫度（Tm為55°C），并以高度有序的凝膠相結(jié)構(gòu)存在，在生理溫度（37°C）下抵抗小分子藥物的滲透性。

膽固醇是脂質(zhì)體雙分子層的另一個(gè)主要成分（優(yōu)選占所有脂質(zhì)成分總重量的約24.3％）。它被用于穩(wěn)定脂質(zhì)體磷脂膜免受血漿蛋白的破壞，減少血漿調(diào)理素與脂質(zhì)體的結(jié)合，而后者負(fù)責(zé)將脂質(zhì)體從血液循環(huán)中快速清除。此外，膽固醇與磷脂雙分子層結(jié)合，可以降低溶質(zhì)/藥物的滲透性。

MPEG-2000-DSPE是脂質(zhì)體雙分子層的一個(gè)微量組分（優(yōu)選占所有脂質(zhì)成分總重量的約1.3％）。它在脂質(zhì)體表面提供一個(gè)極小的空間屏障，防止脂質(zhì)體聚集。MPEG-2000-DSPE包被的脂質(zhì)體在大小和藥物包封方面表現(xiàn)穩(wěn)定，通過平均分子量和多分散性指數(shù)等技術(shù)參數(shù)進(jìn)行衡量。

脂質(zhì)體分散在由HEPES緩沖液、氯化鈉和注射用水組成的緩沖水溶液中。

在成品生產(chǎn)過程的初始階段，鹽酸伊立替康三水合物活性物質(zhì)溶解在葡萄糖溶液中。隨后將其與脂質(zhì)體混合，通過主動載藥方式，沉淀并在脂質(zhì)體中封裝為伊立替康八硫酸蔗糖鹽。鹽酸鹽反離子被蔗糖酸鹽取代，在脂質(zhì)體內(nèi)形成伊立替康蔗糖酸鹽。蔗糖酸鹽與活性物質(zhì)包封在脂質(zhì)體中。

成品藥物的關(guān)鍵質(zhì)量參數(shù)為：外觀、伊立替康鑒定、脂質(zhì)鑒定、膽固醇鑒定、伊立替康濃度、藥物包封百分比、伊立替康雜質(zhì)、脂質(zhì)雜質(zhì)、殘留溶劑、細(xì)菌內(nèi)毒素、生物負(fù)荷及無菌性、藥物與磷脂比、磷脂與膽固醇比、容器內(nèi)可提取體積、體外釋放、滲透壓、粒徑、粒徑分布、注射顆粒物、pH值、ζ電位。

本產(chǎn)品采用無菌過濾和無菌灌裝生產(chǎn)。由于成品是脂膜相變溫度為55℃的脂質(zhì)體，無法像普通水相產(chǎn)品一樣通過高溫進(jìn)行末端滅菌，滅菌方法因此得到適當(dāng)?shù)恼{(diào)整。

（2）蔗糖八硫酸酯鹽載藥方法的創(chuàng)新應(yīng)用

在藥物開發(fā)過程中，篩選了許多不同劑型的陰離子藥物包封液。研究發(fā)現(xiàn)蔗糖八硫酸鹽是一種較好的陰離子藥物包埋溶液。 蔗糖八硫酸酯鹽（sucrose octasulphate）加入到成品生產(chǎn)過程中，通過反應(yīng)生成三乙銨蔗糖八硫酸鹽（triethylammonium sucrose octasulphate，TEA-SOS）。與其他劑型相比，該劑型維持了包封率，且伊立替康在脂質(zhì)體中的保留率較高。

蔗糖八硫酸酯鉀（K-SOS）【CDE登記號：F20210000349；AVT貨號：011001，藥用注射級別，GMP生產(chǎn)，大批量現(xiàn)貨供應(yīng)】是一種新型輔料，以它為原料，制備了用于脂質(zhì)體載藥的三乙銨蔗糖八硫酸酯鹽（TEA-SOS）。蔗糖八硫酸酯鹽通過離子交換轉(zhuǎn)化為TEA-SOS。TEA-SOS與脂質(zhì)經(jīng)聚碳酸酯膜擠壓被動包裹形成脂質(zhì)體。隨后，通過過濾除去脂質(zhì)體外部的TEA-SOS，形成跨脂質(zhì)體脂膜的電化學(xué)梯度。

圖8 蔗糖八硫酸酯結(jié)構(gòu)式

（3）產(chǎn)品制造和過程控制

制造過程包括五個(gè)主要步驟: 脂質(zhì)體形成（包括脂溶出、多層囊泡（MLV）形成、單層小囊泡（SUV）形成及定型）、主動載藥（滲濾、載藥）、原料藥制劑配制、灌裝完成（包括減少微生物污染水平、無菌過濾）、標(biāo)簽及包裝。 該工藝被認(rèn)為是一種非標(biāo)準(zhǔn)制造工藝。已經(jīng)證明，該制造工藝能夠以可重復(fù)的方式生產(chǎn)出質(zhì)量符合預(yù)期的成品。過程中控制對于這種類型的生產(chǎn)工藝和制藥形式是足夠的。

（4）外源因子

該產(chǎn)品使用從羊毛中提取的膽固醇，供應(yīng)商提供了有效TSE證明。產(chǎn)品中沒有使用其他來自動物或人類的輔料。

（5）實(shí)施方式

根據(jù)原研文件，整理部分實(shí)施方式如下：

實(shí)施方式1：

儲存穩(wěn)定的脂質(zhì)體伊立替康組合物，其具有7.00~7.50的pH并且包含包封伊立替康蔗糖八硫酸酯的伊立替康脂質(zhì)體在囊泡中的分散體，所述囊泡由膽固醇和DSPC和MPEG-2000-DSPE組成，所述脂質(zhì)體伊立替康組合物包含伊立替康部分的濃度等同于，以伊立替康游離無水堿的克數(shù)計(jì)，500mg(±10％)伊立替康部分每mmol總脂質(zhì)體磷脂和4.3mg伊立替康部分每mL所述脂質(zhì)體伊立替康組合物，所述儲存穩(wěn)定的脂質(zhì)體伊立替康組合物在4℃儲存的前6個(gè)月期間穩(wěn)定化以形成小于20mol％溶血-PC。

實(shí)施方式2：

儲存穩(wěn)定的脂質(zhì)體伊立替康組合物在4℃儲存的前6個(gè)月期間穩(wěn)定化以形成小于20mol％溶血-PC，脂質(zhì)體伊立替康組合物通過方法制備，所述方法包括以下步驟：

(a) 形成脂質(zhì)在TEA8SOS硫酸酯濃度為約0.45M的溶液中的分散體，所述溶液的pH為約6，所述分散體中的脂質(zhì)分別為約3:2:0.015摩爾比的DSPC、膽固醇和MPEG-2000-DSPE；

(b)將60-70℃的脂質(zhì)分散體擠出穿過至少一個(gè)0.1μm膜以形成脂質(zhì)體；(c)除去在所述脂質(zhì)體外部的源自TEA8SOS的離子；

(d)將在60-70℃溫度的脂質(zhì)體與使用伊立替康游離堿或伊立替康鹽制備的溶液接觸，由此形成包封伊立替康的脂質(zhì)體的制劑；

(e)除去在所述脂質(zhì)體外部的源自TEA8SOS和依立替康成分的物質(zhì)；

(f)將所述組合物的pH調(diào)節(jié)為7.3。實(shí)施方式3：

前述實(shí)施方式任一項(xiàng)的脂質(zhì)體伊立替康組合物，其具有的總伊立替康部分含量等同于4.3mg/ml伊立替康無水游離堿。實(shí)施方式4：

前述實(shí)施方式任一項(xiàng)的脂質(zhì)體伊立替康組合物，其中包封在所述脂質(zhì)體中的所述伊立替康作為蔗糖八硫酸酯鹽呈凝膠狀態(tài)或沉淀狀態(tài)。

（6）實(shí)施例

基于原研文件，整理實(shí)施例如下：

首先，將形成脂質(zhì)體的脂質(zhì)溶解于加熱的乙醇中。這些脂質(zhì)包括DSPC、膽固醇和MPEG-2000-DSPE，摩爾比為3:2:0.015。所得乙醇-脂質(zhì)組合物分散于包含取代銨和聚陰離子的含水介質(zhì)中。脂質(zhì)體分散體可以例如如下形成：在大于脂質(zhì)轉(zhuǎn)變溫度的溫度(例如60-70℃)，將乙醇脂質(zhì)溶液與包含取代銨離子和聚陰離子的水溶液混合，然后在壓力下將所得脂質(zhì)懸浮液(多層脂質(zhì)體)擠出穿過一個(gè)或多個(gè)聚碳酸酯膜過濾器，所述膜過濾器具有限定的孔徑，例如50nm、80nm、100nm或200nm。優(yōu)選取代銨為質(zhì)子化三乙胺(TEA)，聚陰離子為蔗糖八硫酸酯(SOS)，優(yōu)選以化學(xué)計(jì)量比組合(例如TEA8SOS)。TEA8SOS的濃度可以基于伊立替康加載到脂質(zhì)體中的量進(jìn)行選擇(例如*耗盡脂質(zhì)體上的濃度加載梯度，和/或提供包含約1:8摩爾比的SOS和伊立替康的脂質(zhì)體)。然后除去所有非截留TEA或SOS(通過凝膠過濾，滲析或超濾/滲濾等)。

然后，在可以有效將伊立替康加載到捕獲劑脂質(zhì)體中的條件下(即，在允許伊立替康進(jìn)入脂質(zhì)體中以與離開脂質(zhì)體的TEA交換的條件下)，將所得捕獲劑脂質(zhì)體(例如包封取代銨化合物，例如TEA8SOS)與伊立替康溶液接觸。加載伊立替康的溶液(例如15毫克/毫升的無水伊立替康-HCl，其可以使用相應(yīng)量的伊立替康-HCl三水合物制備)優(yōu)選包含滲透劑(例如5％葡萄糖)和pH為6.5。主動載藥通過增加組合物的溫度高于脂質(zhì)體脂質(zhì)的轉(zhuǎn)變溫度(例如增至60-70℃)以加速取代銨化合物(例如TEA)和伊立替康的跨膜交換來促進(jìn)。在一些實(shí)施方式中，伊立替康蔗糖八硫酸酯在脂質(zhì)體中呈凝膠狀態(tài)或沉淀狀態(tài)。優(yōu)選繼續(xù)通過脂質(zhì)體與取代銨化合物(例如TEA)跨膜交換來加載伊立替康，直到全部取代銨化合物(例如TEA)從脂質(zhì)體中除去，從而耗盡所有跨膜脂質(zhì)體的濃度梯度。

可以除去脂質(zhì)體外伊立替康和取代銨化合物(例如TEA)以得到最終伊立替康脂質(zhì)體產(chǎn)品。這種除去可以通過各種方法促進(jìn)，包括凝膠(尺寸排阻)色譜法、滲析法、離子交換法和超濾/滲濾法。脂質(zhì)體外部介質(zhì)替換為可注射的藥用流體，例如緩沖(優(yōu)選pH為7.2至7.3)等滲鹽水。最后，脂質(zhì)體組合物進(jìn)行滅菌，例如通過0.2微米過濾，將其分配到單劑量小瓶中，標(biāo)記和儲存，例如在2-8℃冷藏，直至使用。在除去剩余脂質(zhì)體外伊立替康和銨/取代銨離子(例如TEA)的同時(shí)，脂質(zhì)體外部介質(zhì)可以用藥用流體替代。

四、 討論

關(guān)于伊立替康脂質(zhì)體，筆者希望從以下幾個(gè)方面進(jìn)行討論：伊立替康脂質(zhì)體藥物研發(fā)的要點(diǎn)；脂質(zhì)體藥物遞送系統(tǒng)；蔗糖八硫酸酯鉀對比硫酸銨兩種主動載藥方式的優(yōu)劣。

（1）伊立替康脂質(zhì)體研發(fā)要點(diǎn)

伊立替康脂質(zhì)體研發(fā)工作聚焦于以下幾點(diǎn)：①選擇一種的反荷離子（counter ion）用于主動載藥；②確定一個(gè)脂質(zhì)膜組分中DSPC與膽固醇的最佳比例，該比例影響脂質(zhì)膜的物化性質(zhì)以及將活性物質(zhì)保留在脂質(zhì)體內(nèi)部的能力；③脂質(zhì)膜組分MPEG-2000-DSPE的選擇，該組分存在于脂質(zhì)膜表面，提供了一個(gè)空間位阻，從而避免脂質(zhì)體聚集；④選擇適當(dāng)?shù)木彌_液，能夠?yàn)樽⑸溆脻饪s液保持最佳pH范圍。

（2）脂質(zhì)體藥物遞送系統(tǒng)

脂質(zhì)體（liposome）是一種由單個(gè)雙分子層（單層）和/或一系列同心雙分子層（多層）組成的球狀微囊，用于包裹營養(yǎng)物質(zhì)或原料藥，大小通常為納米到微米級。脂質(zhì)體的主要組成材料是磷脂和膽固醇。磷脂是脂質(zhì)體的主要成膜材料，常用的磷脂有卵磷脂、磷脂酰膽堿、大豆磷脂、磷脂酰乙醇胺等。

當(dāng)脂質(zhì)體用于藥物遞送時(shí)，藥物通常包封在脂質(zhì)體內(nèi)部，一般而言水溶性藥物包封在水性隔室中，親脂性藥物則包封在脂質(zhì)雙分子層中。脂質(zhì)體作為藥物遞送系統(tǒng)有如下優(yōu)勢：

①被動靶向：脂質(zhì)體被體內(nèi)巨噬細(xì)胞吞噬，形成肝，脾等網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的被動靶向性。

②緩釋作用：脂質(zhì)體包裹的藥物，減少了腎排泄和代謝，形成一個(gè)緩慢釋放的過程。

③降低藥物毒性：被動靶向作用使得藥物容易集中于部分器官，可明顯降低藥物毒性。

④提高穩(wěn)定性：不穩(wěn)定藥物能被磷脂膜保護(hù)，并通過調(diào)節(jié)內(nèi)水相pH、離子濃度等條件，可有針對性地提升目標(biāo)藥物的穩(wěn)定性。

目前脂質(zhì)體作為藥物遞送系統(tǒng)已得到了廣泛應(yīng)用，如抗腫瘤藥物（注射用紫杉醇脂質(zhì)體(南京綠葉制藥)，注射用鹽酸多柔比星脂質(zhì)體（Doxil），注射用柔紅霉素脂質(zhì)體（DaunoXome））；

抗真菌藥物（注射兩性霉素脂質(zhì)體(Amphotec)）；疫苗（甲肝疫苗（Epaxal）、流感疫苗(Inflexal V)）等。

此外，長循環(huán)脂質(zhì)體、主動靶向脂質(zhì)體和遞送生物分子的陽離子脂質(zhì)體已經(jīng)相繼問世，基于這些成果，脂質(zhì)體藥物己愈來愈受到重視并得到廣泛應(yīng)用。

對伊立替康而言，其最初上市的劑型為普通注射劑，但存在嚴(yán)重的不良反應(yīng)，在臨床應(yīng)用上存在一定的局限性。采用脂質(zhì)體作為伊立替康給藥載體，可避免生理?xiàng)l件下伊立替康大量轉(zhuǎn)變?yōu)轸人猁}形式，顯著提高藥效，同時(shí)增加藥物向腫瘤部位的轉(zhuǎn)運(yùn)，降低不良反應(yīng)。

（3）蔗糖八硫酸酯三乙胺對比硫酸銨：兩種主動載藥方式的比較

脂質(zhì)體常用制備方法主要有薄膜分散法、逆相蒸發(fā)法、注入法、超聲波分散法等。在制備含藥脂質(zhì)體時(shí)，根據(jù)藥物被裝載的機(jī)理不同，又可分為被動載藥法與主動載藥法兩大類。

傳統(tǒng)上采用較多的是被動載藥法，即首先將藥物溶于水相或有機(jī)相，然后用適宜方式制備含藥脂質(zhì)體。但該方法僅適用于脂溶性或水溶性強(qiáng)的藥物，而對于兩親性藥物，如某些弱酸弱堿，其油水分配系數(shù)受介質(zhì)pH和離子強(qiáng)度的影響較大，用被動載藥法制得的脂質(zhì)體包封率低。

主動載藥法，即通過內(nèi)外水相的不同離子或化合物梯度進(jìn)行載藥，對兩親性藥物脂質(zhì)體的包封率高、滲漏少。鹽酸伊立替康作為兩親弱堿性藥物，其水溶性較好，采用主動載藥法可獲得較高的包封率。

美國FDA于2015年10月批準(zhǔn)上市的鹽酸伊立替康脂質(zhì)體注射液，采用的主動載藥方法是蔗糖八硫酸酯三乙胺（TEA8SOS）梯度法。中國藥科大學(xué)的吳剛等對這兩種主動載藥方式進(jìn)行了研究與對比。

載藥量方面，兩種方法的載藥量分別為32.0%、25.8%，蔗糖八硫酸酯法略勝。

釋藥方面，在PBS中的釋放結(jié)果表明，兩種主動載藥法制備的鹽酸伊立替康脂質(zhì)體的釋藥速率存在明顯差別（24h時(shí)硫酸銨梯度法制備的伊立替康脂質(zhì)體釋藥比例已達(dá)90%，而蔗糖八硫酸酯法對應(yīng)的釋藥比例僅約40%)。由于蔗糖八硫酸酯和鹽酸伊立替康可以在內(nèi)水相中形成沉淀，因此提高了鹽酸伊立替康在脂質(zhì)體中的滯留效果，使藥物釋放速率明顯減慢。

圖8 兩種主動載藥方式制備的鹽酸伊立替康脂質(zhì)體的體外釋放曲線（n=3）

如上文所述，由于伊立替康的內(nèi)酯環(huán)結(jié)構(gòu)在中性及堿性溶液中不穩(wěn)定，從脂質(zhì)體中釋放出的藥物在生理?xiàng)l件下容易水解成沒有活性且毒性更高的開環(huán)產(chǎn)物從而降低藥效，因此與硫酸銨梯度法相比，以蔗糖八硫酸酯三乙胺梯度法主動載藥的伊立替康脂質(zhì)體可以更好地保持藥物活性。

五、 回顧與展望

伊立替康是喜樹堿的半合成衍生物，早在1960年研發(fā)人員就發(fā)現(xiàn)了喜樹堿的抗腫瘤特性，1980年發(fā)現(xiàn)了它與拓?fù)洚悩?gòu)酶I的相互作用機(jī)理，后來經(jīng)過對喜樹堿的進(jìn)一步研究，分別于1994年和1996年研制出了兩種新型水溶性喜樹堿類衍生物：伊立替康（irinotecan）和拓?fù)涮婵担╰opotecan），然而由于伊立替康在生理?xiàng)l件下（pH7.4）會大量水解成沒有活性且毒性更高的開環(huán)產(chǎn)物導(dǎo)致嚴(yán)重的不良反應(yīng)，導(dǎo)致其在臨床應(yīng)用上一直存在較大的局限性。

好在，快速發(fā)展的醫(yī)藥科技為這一困局帶來了曙光。長循環(huán)脂質(zhì)體等新興藥物遞送技術(shù)的使用，蔗糖八硫酸酯三乙胺梯度法等新型主動載藥方法的建立，以及蔗糖八硫酸酯鹽、DSPE-MPEG2000、海藻糖等新型藥用輔料的出現(xiàn)，這些因素在研發(fā)人員十余年甚至數(shù)十年的堅(jiān)持與探索下，統(tǒng)合到一起，幫助伊立替康這一“古老"的化合物再次煥發(fā)出生機(jī)。

在國家越來越重視醫(yī)藥創(chuàng)新的當(dāng)下，這些不斷涌現(xiàn)的新技術(shù)，是否是國內(nèi)醫(yī)藥企業(yè)彎道超車的一個(gè)機(jī)會？在新藥物新靶點(diǎn)等領(lǐng)域競爭已然的當(dāng)下，我們是否可以分出一些精力，去回顧一些看上去不夠“新"的東西？

比如脂質(zhì)體，當(dāng)大部分人的目光聚焦于它用于mRNA疫苗的遞送時(shí)，是否有一些生產(chǎn)使用多年、早已習(xí)以為常的藥物，可以在它的幫助下或提高藥效，或減少不良反應(yīng)，或增加新的適應(yīng)癥？

再比如蔗糖八硫酸酯鹽，它可以用來提高伊立替康脂質(zhì)體的主動載藥效果，延長釋藥時(shí)間，那么用于類似伊立替康的化合物的主動載藥，是不是也有可能起到一定的效果？

用新的技術(shù)，把老的產(chǎn)品再做一遍。這聽起來或許不夠新，不夠酷。但只要足夠?qū)嵱茫灰軒偷綇V大患者，在筆者看來，就是一件值得去做的事。

關(guān)于脂質(zhì)體，蔗糖八硫酸酯鹽等技術(shù)的應(yīng)用創(chuàng)新，您又有哪些想法或觀點(diǎn)呢？歡迎在評論區(qū)留言，如果被精選，我們將與您聯(lián)系并寄出精美禮物一份，歡迎共同探討~

參考資料：

1. Onivyde文件（申請公布號CN 108366965 A）

2. EMA，onivyde-epar-public-assessment-report_en

3. 吳剛、周玉潔、魏悅蕾等，兩種主動載藥的伊立替康脂質(zhì)體釋藥行為的對比考察。中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2018年８月第38卷第16期

4. 艾偉拓，學(xué)術(shù)推廣專題資料，伊立替康脂質(zhì)體深度分析